1、清洗干净制胶所用玻璃板、隔离片、梳子、海绵垫等设备，并用吹风机吹干；

2、将海绵垫固定在制胶架上，把制胶板系统垂直放在海绵上方，用分布在制胶架两侧的偏心轮固定好制胶板系统；

3、在注射器上标记“高”和“低”浓度，并安装相关的配件，调整梯度灌胶系统的刻度到适当的位置；

4、配制两种浓度的丙烯酰胺溶液，分别装入两个离心管中；

5、灌胶前向离心管中加入20μl TEMED和100μl 10%APS，迅速盖上盖子后，上下颠倒数次混匀，用标有“高浓度”的注射器吸取高浓度的胶，用标有“低浓度”的注射器吸取低浓度的胶，吸取完后赶走注射器中的气泡；

6、将注射器固定在梯度灌胶系统上，缓慢匀速将胶注入制胶板中，灌完胶后，小心插入梳子，让胶凝聚约1h；

7、清洗注射器等已用完设备；

8、胶聚合后小心拔下梳子，将胶固定在架子上，然后放入电泳槽中，清洗点样孔，盖上温控装置，打开电源，使温度上升至60℃；

9、点样、电泳；

10、染色、观察。